2. Определение С-концевых аминокислот

При нагревании пептида с безводным гидразином происходит расщепление всех пептидных связей, в результате чего в гидразиды превращаются все аминокислоты, кроме той, которая занимает С-концевое положение:

Обрабатывая полученную смесь каким-нибудь альдегидом, например энантолом, гидразиды аминокислот превращают в соответствующие гидразоны, легко отделяемые от незамещенной аминокислоты, которая идентифицируется хроматографически. Эта реакция получила название гидразинолиза.

Большое значение приобрел ферментативный метод определения С-концевой последовательности аминокислот. Для этой цели используют фермент карбоксипептидазу, выделяемую из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Карбоксипептидаза гидролизует только те пептидные связи, которые образованы С-концевой аминокислотой, имеющей свободную α-карбоксильную группу. Поэтому под действием этого фермента от пептида последовательно отщепляются аминокислоты, начиная с С-концевой. Это позволяет определить взаимное расположение чередующихся аминокислотных остатков.

Ферментативные способы определения последовательности аминокислотных остатков в пептидах иллюстрируются схемой:

Если пептидная цепь настолько длинна, что рассмотренные методы не позволяют полностью установить ее строение, полипептид осторожно гидролизуют (с применением специфических ферментов или другими методами), расщепляя его на небольшое число более коротких пептидов. Полученную смесь тщательно разделяют и анализируют выделенные пептиды, после чего устанавливают структуру исходного полипептида.

Современные способы установления строения пептидов настолько хорошо разработаны, что удалось расшифровать структуру ряда природных полипептидов.