Неорганическая
Органическая
Коллоидная
Биологическая
Биохимия
Токсикологическая
Экологическая
Химическая энциклопедия
Советская энциклопедия
Справочник по веществам
Гетероциклы
Теплотехника
Углеводы
Квантовая химия
Моделирование ХТС
Номенклатура
Таблица Менделеева
Неорганические реакции
Органические реакции
Молярные массы
Форматирование формул
Редактор формул
Уравнивание реакций
Электронное строение атомов
Игра «Таблица Менделеева»
Термодинамические свойства
Конвертер величин
Гальванопара
Форум
Лекарства
Фармацевтика
Термины биохимии
Коды загрязняющих веществ
Стандартизация
Каталог предприятий


1. Определение N-концевых аминокислот

Наиболее часто для этой цели применяется динитрофенальный метод. Исследуемый пептид обрабатывают в щелочной среде при 25—40 °С 1-фтор-2,4-динитробензолом, который реагирует со свободной аминогруппой пептида:

Полученное N-2,4-динитрофенильное производное пептида подвергают полному гидролизу кипящей соляной кислотой. При этом пептидные (амидные) связи гидролизуются, а более прочная связь между 2,4-динитрофенильным остатком и N-концевой аминокислотой сохраняется. Гидролизат содержит все аминокислоты, входившие в состав пептида, кроме N-концевой, которая превратилась в N-2,4-динитрофениламинокислоту:

Последняя легко отделяется от незамещенных аминокислот и идентифицируется хроматографически.

Большое распространение при исследовании пептидов получил фенилтиогидантоиновый метод, который позволяет устанавливать последовательность расположения нескольких аминокислот, примыкающих к аминному концу пептида. Пептид обрабатывают фенилизотиоцианатом в слабощелочной среде, превращая его в N-фенилтиокарбаминовое производное:

В кислой среде оно легко распадается, отщепляя N-концевую аминокислоту в виде соответствующего фенилтиогидантоина (образование устойчивого пятичленного цикла):

В результате этих реакций пептидная цепь укорачивается на одну аминокислоту, занимавшую N-концевое положение в пептидной цепи. Фенилтиогидантоин отделяют и подвергают кислотному или щелочному гидролизу в жестких условиях. Регенерирующуюся N-концевую аминокислоту идентифицируют хроматографически.

Пептид, укороченный на один аминокислотный остаток, обрабатывают фенилизотиоцианатом и еще раз повторяют все операции, отщепляя следующую аминокислоту. Практически удается провести 5—9 последовательных отщеплений аминокислот в пробе весом в несколько миллиграммов.

В последнее время разработан ферментативный метод установления чередования аминокислот в пептидах, начиная с N-концевой. Для этой цели исследуемый пептид подвергают гидролизу ферментом лейцинаминопептидазой, выделяемым из почек свиней. Этот фермент может расщеплять пептид лишь в том случае, если в α-положении к пептидной связи имеется аминогруппа. Вследствие такого специфического действия фермента в гидролизате, по мере протекания гидролиза появляются свободные аминокислоты, последовательно отщепляющиеся с аминного конца пептидной цепи. Наблюдая за процессом поочередного отщепления свободных аминокислот при помощи хроматографии, устанавливают последовательность расположения аминокислот в пептиде.


     © ХиМиК.ру




Реклама   Обратная связь   Дизайн